高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS）消毒劑殘留檢測技術(shù)研究與應(yīng)用

高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS）消毒劑殘留檢測技術(shù)研究與應(yīng)用  

一、引言與法規(guī)依據(jù)  

消毒劑殘留檢測是保障食品接觸表面、醫(yī)療環(huán)境及公共衛(wèi)生安全的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS）憑借高靈敏度（檢出限可達(dá)ng/L級）和高選擇性，成為復(fù)雜基質(zhì)中痕量消毒劑及其降解產(chǎn)物同步分析的金標(biāo)準(zhǔn)。2025年實施的GB14930.2-2025《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)消毒劑》明確要求：食品接觸表面過氧乙酸殘留≤0.5mg/L，季銨鹽類≤0.1mg/kg，且需采用HPLC-MS/MS法進(jìn)行確證110。歐盟EN14885標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步強(qiáng)調(diào)，復(fù)合消毒劑需同步檢測降解產(chǎn)物（如過氧乙酸→乙酸），方法驗證需涵蓋基質(zhì)效應(yīng)評估和穩(wěn)定性測試314。  

二、實驗方法與優(yōu)化  

（一）樣品前處理創(chuàng)新  

1.復(fù)雜基質(zhì)處理  

針對禽肉、乳制品等高蛋白基質(zhì)，采用QuEChERS結(jié)合固相萃取：  

提取：10g樣品+15mL乙腈（含0.1%甲酸），渦旋2min，超聲提取15min；  

凈化：PrimeHLB固相萃取柱（500mg/6mL），依次用5mL水、5mL甲醇活化，上樣后5mL水-乙腈（9:1）淋洗，5mL甲醇洗脫；  

濃縮：40℃氮吹至干，1mL流動相（0.1%甲酸水-乙腈=50:50）復(fù)溶，過0.22μm濾膜4。  

2.揮發(fā)性消毒劑衍生化  

甲醛、戊二醛等醛類消毒劑采用2,4-二硝ji苯肼（DNPH）衍生：  

衍生條件：樣品中加入100μLDNPH（10mg/mL），60℃水浴30min，生成腙類衍生物；  

優(yōu)勢：改善色譜保留，m/z211→152（甲醛-DNPH），檢出限達(dá)0.01μg/L15。  

（二）色譜與質(zhì)譜條件  

1.色譜分離  

色譜柱：WatersACQUITYUPLCHSST3（100mm×2.1mm，1.8μm）；  

流動相：A相0.1%甲酸水，B相乙腈，梯度洗脫（0-3min：5%-95%B，保持2min）；  

流速：0.3mL/min，柱溫40℃，進(jìn)樣量5μL412。  

2.質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化  

采用電噴霧正離子模式（ESI+），多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式定量，關(guān)鍵參數(shù)如下：  

消毒劑母離子（m/z）定量離子對（m/z）碰撞能量（eV）LOD（μg/L）  

過氧乙酸7777→59150.05  

苯扎lv銨304304→166250.1  

甲醛-DNPH211211→152200.01  

氯己定506506→355300.08  

質(zhì)譜條件：噴霧電壓3.5kV，離子傳輸管溫度350℃，鞘氣流量11L/min，輔助氣流量5L/min315。  

三、方法驗證與基質(zhì)效應(yīng)  

（一）方法學(xué)參數(shù)  

線性范圍：0.5-100ng/mL，相關(guān)系數(shù)r>0.999（以苯扎lv銨為例）；  

精密度：日內(nèi)RSD<6%，日間RSD<8%（n=6）；  

回收率：85%-115%（加標(biāo)水平0.1-10μg/kg）；  

基質(zhì)效應(yīng)：采用同位素內(nèi)標(biāo)（如苯扎lv銨-D8）校正，ME%控制在80%-120%414。  

（二）基質(zhì)效應(yīng)消除策略  

基質(zhì)匹配校準(zhǔn)：采用空白樣品提取液配制標(biāo)準(zhǔn)曲線，抵消油脂、蛋白質(zhì)對離子化的抑制；  

色譜柱選擇：HSST3色譜柱（反相-親水混合模式）改善極性消毒劑（如過氧乙酸）保留，減少峰拖尾12。  

四、實際應(yīng)用案例  

（一）食品加工設(shè)備檢測  

某乳制品加工廠CIP系統(tǒng)消毒后，HPLC-MS/MS檢測結(jié)果：  

季銨鹽殘留：0.08mg/kg（限值0.1mg/kg）；  

過氧乙酸殘留：未檢出（<0.05mg/L），符合GB14930.2-2025要求1015。  

（二）醫(yī)療表面消毒驗證  

ICU病床扶手采樣后檢測：  

氯己定殘留：0.03mg/m2（接觸時間30min）；  

自然菌殺滅率：99.97%，符合WS/T774-2021標(biāo)準(zhǔn)16。  

五、新興趨勢與挑戰(zhàn)  

（一）復(fù)合消毒劑同步檢測  

采用HILIC色譜柱（親水作用）分離EO與過氧乙酸，MRM模式同時監(jiān)測m/z44（EO）和m/z77（過氧乙酸），解決共流出干擾38。  

（二）現(xiàn)場快速檢測技術(shù)  

便攜式HPLC-MS/MS系統(tǒng)開發(fā)：  

微型化離子源（Miniβ），檢測時間縮短至15分鐘；  

適用于突發(fā)公共衛(wèi)生事件的現(xiàn)場篩查14。  

六、結(jié)論  

HPLC-MS/MS法為消毒劑殘留檢測提供了高靈敏度和高特異性解決方案，通過前處理優(yōu)化（如QuEChERS-SPE聯(lián)用）和基質(zhì)效應(yīng)校正，可滿足GB14930.2-2025等最新國標(biāo)的嚴(yán)格要求。未來需進(jìn)一步開發(fā)多組分同步分析方法，并推動便攜式設(shè)備在現(xiàn)場監(jiān)測中的應(yīng)用，為食品安全和公共衛(wèi)生防控提供技術(shù)支撐。  

關(guān)鍵詞：HPLC-MS/MS；消毒劑殘留；基質(zhì)效應(yīng)；QuEChERS；國標(biāo)GB14930.2-2025  

參考文獻(xiàn)  

[1]GB14930.2-2025食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)消毒劑.  

[2]鄧航等.PrimeHLBSPE結(jié)合HPLC-MS/MS測定羊奶粉中6種消毒劑殘留[J].現(xiàn)代食品科技,2025.  

[3]EPA.TestMethodsforMeasuringDisinfectantResidueLevelsonHardSurfaces[Z].2025.  

[4]中華人民共和國衛(wèi)生健康委員會.消毒劑殘留檢測方法指南[S].2025.